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應用研究
注射用鹽酸地爾硫卓對細菌內毒素的作用特點及解決辦法
Date: 2018-10-20 11:24:26

韋冬苗  董光宴(審校)
(湛江博康海洋生物有限公司,湛江524094)
      注射用鹽酸地爾硫卓為無菌凍干品,白色疏松塊狀物及粉末。通過作用于冠脈血管及末梢血管的心管平滑肌及房室結,抑制Ca2+向細胞內流入,而顯示血管擴張作用及延長房室結傳導時間的作用,從而對高血壓、心律不齊、心絞痛有效。
      鹽酸地爾硫卓做細菌內毒素檢查時回收率偏低,無法正常開展細菌內毒素檢查,通過考察發現其回收率與混合時間有關,混合時間越長回收率越低。通過特殊介質處理可以克服該現象,使注射用鹽酸地爾硫卓細菌內毒素檢查避免假陰性的產生,能客觀準確的檢測樣品中的細菌內毒素含量。
      1、作用特點
      按照常規方法,對注射用鹽酸地爾硫卓進行細菌內毒素定量檢測考察,考察結果發現回收率偏低而且不穩定。根據該情況,我們對該品種進行回收率試驗分析。
      考察因素:回收率、混合時間。
      考察方法:定量法回收率試驗時,將外加內毒素供試品管(即藥典要求B管)按照同樣方法平行做5管,每管放置漩渦混合器振蕩,按試管編號分別振蕩10s、20s、30s、60s和120s,其它操作按藥典要求執行。
      考察次數:重復3次。
      標準曲線:lgT=2.9238-0.2962lgC(相關系數r=0.9916)
      考察數據:
第一次考察數據記錄


      標準曲線相關系數的絕對值大于0.9800,標準曲線有效;陰性對照均未反應、陽性對照檢測值分別為理論值的88.8%、101.9%、113.4%,實驗數據有效。
      考察結果:
      鹽酸地爾硫卓做細菌內毒素檢查時回收率偏低,無法正常開展細菌內毒素檢查,通過考察發現其回收率與樣品濃度、樣品酸堿度無關;與混合時間有關,混合時間越長回收率越低,當混合時間達到120s時回收率最低只有15%,不同的實驗室不同實驗人員得到回收率有一定的差異,但回收率與混合時間之間的變化趨勢均相同,即混合時間越長回收率越低。鹽酸地爾硫卓做細菌內毒素檢查時回收率偏低,其回收率與樣品溶液存放時間是否相關,有興趣的研究者可以考察。
      1、原因分析
      注射用鹽酸地爾硫卓為無菌凍干品,白色疏松塊狀物及粉末,其酸堿度為4.5~6.5。考察結果顯示其回收率與樣品濃度、樣品酸堿度無關;與混合時間有關,混合時間越長回收率越低。樣品酸堿度為4.5~6.5不會破壞內毒素,酸堿度偏低可能對內毒素與鱟試劑反應產生抑制作用,但這種抑制作用與混合時間沒有關系,不會因混合時間延長導致回收率偏低。產生這種情況的可能原因:1、類似吸附性作用,注射用鹽酸地爾硫卓將細菌內毒素吸附在其分子結構上,隨混合時間延長吸附越充分,從而導致混合時間越長回收率越低;2、類似包合物作用,注射用鹽酸地爾硫卓將細菌內毒素包合在其分子結構內,隨混合時間延長細菌內毒素進入注射用鹽酸地爾硫卓分子內越徹底,從而導致混合時間越長回收率越低;3、其它原因,注射用鹽酸地爾硫卓阻礙了細菌內毒素與鱟試劑的反應。
      以上可以歸納為,細菌內毒素的溶解競爭問題,即我們必須要克服注射用鹽酸地爾硫卓對細菌內毒素的吸附或包合作用,讓細菌內毒素游離在溶液中能正常與鱟試劑發生反應,避免細菌內毒素被吸附或包合,導致假陰性產生。
      2、解決辦法
      根據注射用鹽酸地爾硫卓與細菌內毒素反應特點,混合時間越長回收率越低,我們在樣品溶液中加入一種特殊基質,這種基質能讓細菌內毒素游離在溶液中,使細菌內毒素與鱟試劑能正常發生反應,避免細菌內毒素被吸附或包合,解決回收率不穩定偏低的現象。我們對該基質的作用進行考察。
      考察因素:回收率、混合時間。
      考察方法:定量法回收率試驗時(加入基質),將外加內毒素供試品管(即藥典要求B管)按照同樣方法平行做4管,每管放置漩渦混合器振蕩時間不同,將試管編號分別振蕩30s、60s、120s和240s,其它操作按藥典要求執行。
      考察次數:重復2次
      標準曲線:lgT=2.9238-0.2962lgC(相關系數r=0.9916)
      考察數據:

      陰性對照均未反應、陽性對照檢測值分別為理論值的126.5%、102.8%,實驗數據有效;將基質加入陽性對照分別振蕩30s至240s其回收率分別為87.2%、87.6%、102.7%和103.7%,基質對細菌內毒素與鱟試劑的反應無影響,不產生干擾作用,檢測結果不隨混合時間的變化而變化。
      考察結果:
      過考察,在注射用鹽酸地爾硫卓溶液中加入這種特殊基質達到了預期目的,即使混合240s其回收率也大于75%,符合藥典規定。這種基質能讓細菌內毒素游離在溶液中,使細菌內毒素與鱟試劑正常發生反應,避免細菌內毒素被吸附或包合,解決回收率不穩定偏低的現象,解決了注射用鹽酸地爾硫卓與細菌內毒素混合時間越長回收率越低的問題,解決了注射用鹽酸地爾硫卓做細菌內毒素試驗遇到的困難,使注射用鹽酸地爾硫卓能正常開展細菌內毒素定量檢查法。
 
(本文完)
 

上一篇:關于鱟試劑與細菌內毒素檢查法標準化及檢查結果的確認
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